nmt作為生命科學(xué)底層核心技術(shù)，是建立活體創(chuàng)新科研平臺的*技術(shù)。2005年~2020年，nmt已扎根中國15年。2020年，中國nmt銷往瑞士蘇黎世大學(xué)，正式打開歐洲市場。
基本信息
主題： nkcc2（離子轉(zhuǎn)運(yùn)體）參與胃酸分泌的實(shí)時生理證據(jù)
期刊：european journal of pharmacology
影響因子：3.17
研究使用平臺：nmt活體組織創(chuàng)新科研平臺
標(biāo)題：na+-k+-2cl- cotransporter 2 located in the human and murine gastric mucosa is involved in secretagogue-induced gastric acid secretion and is downregulated in lipopolysaccharide-treated mice
作者：首都醫(yī)科大學(xué)朱進(jìn)霞、鄭麗飛
檢測離子/分子指標(biāo)
h+
檢測樣品
小鼠胃黏膜活體組織
中文摘要（谷歌機(jī)翻）
na+-k+-2cl-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（nkcc）在胃壁細(xì)胞中的表達(dá)異常高。*是一種強(qiáng)效的利尿劑，可阻斷nkcc，通常會導(dǎo)致胃酸分泌減少。內(nèi)毒素血癥在體內(nèi)引起低血脂癥，其中脂多糖（lps）起著重要作用。這項研究旨在調(diào)查nkcc2對lps治療的小鼠胃酸分泌及其改變的影響。非損傷微測技術(shù)（non-invasive micro-test technology，nmt）和實(shí)時ph滴定結(jié)合rna干擾被用來確定*對胃酸分泌的影響。進(jìn)行了免疫化學(xué)和蛋白質(zhì)印跡研究以調(diào)查lps處理的小鼠中nkcc2表達(dá)的變化。nkcc1和nkcc2的免疫反應(yīng)性主要觀察到壁細(xì)胞的基底外側(cè)和頂膜附近。用*預(yù)處理可降低小鼠胃粘膜中組胺刺激的h+流速。*的頂端而不是基底外側(cè)的添加抑制了福司可林或組胺/3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（ibmx）誘導(dǎo)的胃酸分泌。nkcc2 sirna的體內(nèi)治療可抑制毛喉素誘導(dǎo)的酸分泌。在組胺刺激后，大部分nkcc2靶向胃粘膜和原代培養(yǎng)的壁細(xì)胞中的頂膜。lps處理的小鼠的胃黏膜中nkcc2和囊泡相關(guān)膜蛋白2（vamp2）的表達(dá)降低，但h+/k+-atpase的表達(dá)沒有降低。*阻斷頂葉nkcc2而不是基底外側(cè)nkcc1可抑制促分泌素誘導(dǎo)的胃酸分泌，在此期間可能需要nkcc2的膜運(yùn)輸。nkcc2和vamp2的下調(diào)可能與lps誘導(dǎo)的胃酸分泌減少有關(guān)。
離子/分子流實(shí)驗(yàn)處理方法
10 μm布美他尼、100 μm組胺、300 μm*分別處理小鼠胃黏
離子/分子流實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖1b所示的折線圖是使用nmt技術(shù)監(jiān)測小鼠胃黏膜h+流速變化的結(jié)果。加入組胺（100 μm）引起h+流速增加，從0.52±0.02增加到0.74±0.03 pmol cm-2 s-1，這被組胺h2受體拮抗劑*（300 μm）抑制（圖1c）。*（10 μm）預(yù)處理可明顯抑制組胺誘導(dǎo)的h+流速，但對基礎(chǔ)h+流速無影響，表明nkcc在促酸分泌中起作用。
圖1 不同處理下小鼠胃黏膜h+流速的變化情況
其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果
雙重染色免疫熒光結(jié)果表明，nkcc1的免疫反應(yīng)性（ir）主要出現(xiàn)在表達(dá)h+/k+-atpase的細(xì)胞的基底外側(cè)膜，nkcc2 ir在小鼠和人胃粘膜中h+/k+-atpase陽性細(xì)胞的頂端側(cè)突出。在培養(yǎng)的大鼠胃壁細(xì)胞中也觀察到nkcc2 ir。nkcc2信號也作為陽性對照在小鼠和大鼠腎臟中進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)在腎小管的頂端觀察到強(qiáng)烈的nkcc2 ir。
在靜息條件下，*在腔管或漿膜的處理均未顯著抑制胃酸分泌。這些結(jié)果表明，抑制頂端膜上高表達(dá)的nkcc2，可以顯著抑制促分泌素誘導(dǎo)的胃酸分泌。
nkcc2基因敲除可降低forskolin刺激的胃酸分泌。
組胺刺激nkcc2在胃粘膜和培養(yǎng)壁細(xì)胞中的易位。
脂多糖（lipopolysaccharide，lps）處理的小鼠中nkcc2和vamp2表達(dá)降低。
結(jié)論
本研究揭示了nkcc2（*的腔管靶點(diǎn)）在維持胃酸分泌中的重要性。特別是，我們提出的證據(jù)表明nkcc2的膜轉(zhuǎn)位可能與酸分泌有關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)為胃酸分泌的復(fù)雜機(jī)制提供了新的見解。nkcc2和vamp2的下調(diào)可能與lps誘導(dǎo)的胃酸分泌減少有關(guān)。
離子流實(shí)驗(yàn)使用的測試液
141.8 mm nacl, 5.9 mm kcl, 1.2 mm mgcl2, 10 mm hepes acid, 5.6 mm tris, 2.56 mm cacl2, 2 g glucose, ph 7.4