蘇州市萊頓科學(xué)儀器有限公司
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液相色譜法—檢測(cè)黃曲霉毒素殘留
1.原理
樣品經(jīng)有機(jī)溶劑提取、凈化和衍生化反應(yīng)后，濃縮液注人hplc儀，經(jīng)色譜柱分離，分離出的組分依次進(jìn)人熒光檢測(cè)器（發(fā)射波長(zhǎng)360 nm、激發(fā)波長(zhǎng)245 nm），產(chǎn)生相應(yīng)的電信號(hào)，由記錄儀記錄響應(yīng)信號(hào)，經(jīng)微處理機(jī)自動(dòng)計(jì)算及打印出樣品中aft含量（ng）。
2.儀器
hpi.c儀（具熒光檢測(cè)器）。
3.試劑
①硅鎂型吸附劑：100-1200目，350℃烘2 h，冷后裝入密閉容器中，用前加水15％減活，平衡48h?？烧r續(xù)傅用7天。
②流動(dòng)相：甲醇+0.01mol·l-1 kh2p04（1+1）溶液配制后，經(jīng)0.45 um濾膜抽濾并脫氣。
③層析柱，底層和上層為2.cin厚的無(wú)水na2s04，中層為0.4 g硅鎂吸附劑，均以氯仿濕潤(rùn)。
④其他試劑參照薄層層析法。
4.儀器工作條件
①具熒光檢測(cè)器（激發(fā)波長(zhǎng)245 nm、發(fā)射波長(zhǎng)360 nm）。
gain置16，span置max。
柱：c18 10um（radial pak cartridges）。
流動(dòng)相：甲醇+0.01tool／l kh2p04（1+1）。
流速：1.3 ml／min。
②進(jìn)樣量：10 ul。
5.檢測(cè)步驟
①樣品提取與凈化：準(zhǔn)確稱取樣品10 g于具塞錐形瓶中，加50 mi。氯仿，振蕩30 min，過(guò)濾于層析柱中，用氯仿+正己烷（1+1）8 mi，，氯仿+甲醇（9+1）10 ml，淋洗除雜質(zhì)，zui后用20 ml丙酮+水（99+1）洗脫黃曲霉毒素，收集于燒杯中，在50℃水浴中揮干溶劑，再用氯仿分次將殘?jiān)慈? ml具塞試管中，并于50℃水浴中通nz吹干。
②衍生化反應(yīng)：向具塞試管中加200ui。正己烷，50ul三fu乙shuan，將蓋蓋緊，充分混勻1 min，靜置30 rain后用nz吹干。加100ul流動(dòng)相，充分混勻，待檢。
③標(biāo)準(zhǔn)液的處理：取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，按樣品處理方法萃取、凈化和衍生化反應(yīng)，定容，使aftbl、aftmlzui后濃度均為0.1 ng·ul-1。
aft保留時(shí)間及標(biāo)準(zhǔn)色譜圖：保留時(shí)間（min） ：aftm1 3.36，aftg1 4.72，aftb1 16.00，ft g2 10.12，aftb2 14.40。
6.說(shuō)明
①本法應(yīng)在1天內(nèi)完成檢測(cè)，否則結(jié)果偏低。
②層析柱中硅鎂吸附劑應(yīng)先用氯仿調(diào)為糊狀加入。